在組織學(xué)染色技術(shù)中，蘇木精-伊紅（HE）染色法是應(yīng)用很普遍的染色方法之一。蘇木精作為堿性染料，主要用于細(xì)胞核染色，而伊紅作為酸性染料，則用于細(xì)胞質(zhì)染色。在蘇木精染色完成后，為確保細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的清晰區(qū)分，分色處理成為關(guān)鍵步驟。本文將詳細(xì)解析蘇木精染色后常用的分色試劑及其操作方法。

　　分色試劑的選擇

　　蘇木精染色后，常用的分色試劑是1％鹽酸酒精溶液。鹽酸酒精通過破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，促使色素與組織解離，去除細(xì)胞核中結(jié)合過多的染料以及細(xì)胞質(zhì)中吸附的染料，從而確保伊紅染色時細(xì)胞質(zhì)能夠清晰著色。鹽酸酒精的濃度和分色時間需根據(jù)具體實驗條件進(jìn)行精確控制，以避免分色過度或不足。

　　分色處理的操作步驟

　　染色后水洗：蘇木精染色完成后，首先需用自來水充分沖洗切片，去除多余的染料。

　　分色處理：將切片浸入1％鹽酸酒精溶液中，分色時間通常為數(shù)秒至數(shù)十秒，具體時間需根據(jù)染色效果在顯微鏡下進(jìn)行實時監(jiān)控。分色過程中，應(yīng)觀察細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的染色的情況，確保細(xì)胞核染色清晰而細(xì)胞質(zhì)基本無色。

　　水洗返藍(lán)：分色完成后，需用自來水或稀氨水（如0.5％氫氧化氨水溶液）充分沖洗切片，使細(xì)胞核返藍(lán)。返藍(lán)過程是必要的，因為鹽酸酒精分色后細(xì)胞核會呈現(xiàn)紅褐色，而返藍(lán)后則恢復(fù)為鮮明的藍(lán)色，便于后續(xù)觀察。

　　分色處理的注意事項

　　分色時間的控制：分色時間過長會導(dǎo)致細(xì)胞核染色過淺，甚至脫色；分色時間過短則無法有效去除細(xì)胞質(zhì)中的染料，影響伊紅染色效果。因此，分色時間需根據(jù)實驗條件進(jìn)行精確調(diào)整。

　　試劑的新鮮度：分色試劑的新鮮度對染色效果有明顯影響。使用新鮮的1％鹽酸酒精溶液進(jìn)行分色處理，可以獲得更好的染色效果。

　　顯微鏡監(jiān)控：分色處理過程中，應(yīng)在顯微鏡下實時監(jiān)控染色效果，以便及時調(diào)整分色時間和其他參數(shù)。

　　后續(xù)處理：分色處理完成后，需進(jìn)行充分的水洗和返藍(lán)處理，然后進(jìn)行伊紅染色、脫水、透明和封片等后續(xù)步驟。

　　蘇木精染色后的分色處理是HE染色法中的關(guān)鍵步驟之一。通過選擇合適的分色試劑（如1％鹽酸酒精溶液）和精確控制分色時間及其他參數(shù)，可以確保細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的清晰區(qū)分，從而獲得高質(zhì)量的染色切片。在實際操作中，需嚴(yán)格遵守操作規(guī)程和注意事項，以確保染色效果的穩(wěn)定性和可靠性。